Assim que concluí a graduação, ingressei no Programa de Aprimoramento Profissional (PAP) de Biotecnologia em Saúde do Instituto Butantan. Com duração de 1 ano, o programa foi baseado em uma proteína candidata à vacina contra a Leptospirose. Segue o resumo:
A leptospirose é uma patologia infecciosa febril de início 
repentino que presenta distribuição mundial, sendo endêmica predominantemente em países de clima tropical e em países com saneamento básico. Seu agente etiológico a bactéria helicoidal (espiroqueta) aeróbica obrigatória do gênero Leptospira, sendo a mais importante a Leptospira interrogans sorovar Copenhagueni. Na L. interrogans são encontrados os genes LIC12650 e LIC12660 que codificam proteínas potencialmente relacionadas com virulência. Tais genes formam um operon, denominado VapBC, sendo este um sistema toxina-antitoxina (TA). Os sistemas TA operons codificam uma toxina estável e uma antitoxina instável. A hipótese fisiológica mais aceita da função do sistema de TA é a inibição reversível de crescimento celular sob condições de estresse. Os módulos VapBC são classificados com base na presença de um domínio PIN com atividade ribonucleásica na toxina VapC. Neste trabalho testamos formas diferentes para uma melhor expressão recombinante da proteína VapC, a toxina do sistema toxina-antitoxina, assim como teste de sua atividade ribonuclease. Avaliamos o rendimento de expressões com dois vetores diferentes, pAEsox e pAE. Testamos purificações da proteína recombinante por cromatografia de afinidade a metal e testamos renaturação em três diferentes formas: na própria coluna, diálise e por pressurização. Buscamos a otimização da pressurização, testamos condições diversas na tentativa de um “refolding” com maior rendimento da VapC na forma solúvel.
E teve os seguintes objetivos:
1. Obtenção de VapC em concentrações apropriadas para futura cristalização;
1.1 Escolha do vetor e seleção de clones com alta expressão de VapC
recombinante.
2. Pesquisar estratégias de “refolding” e otimização da pressurização.
Este Projeto foi concluído em Março de 2015 e a monografia resultante encontra-se na biblioteca do próprio Instituto.
Agradecimentos ao orientador Alexandre P. Y. Lopes e a todos do laboratório pela ótima experiência e companhia.
Artigo base: VapC from the Leptospiral VapBC Toxin-Antitoxin Module Displays Ribonuclease Activity on the Initiator tRNA
Relatório Final: Estratégias para Otimização da Produção da Antitoxina Recombinante VapC de Leptospira interrogans.
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